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  • 多肽的合成
  • 本站编辑: 杭州肽佳生物科技有限公司发布日期:2019-11-27 10:25 浏览次数:

  多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程,固相合成顺序一般从C端(羧基端)向 N端(氨基端)合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法,现在多采用固相合成法,从而大大的减轻了每步产品纯化的难度。液相多肽合成现在仍然广泛的使用,在合成短肽和多肽片段上具有合成规模大,合成成本低的显著优点,而且由于是在均相中进行反应,可以选择的反应条件更加丰富,象一些催化氢化,碱性水解等条件,都可以使用,这在固相中,使用却由于反应效率低,以及副反应等原因,无法应用。液相多肽合成中主要采用BOC和Z策略。

     1963年,R.B.Merrifield创立了将多肽羧基端的氨基酸固定在不溶性树脂上,然后在此树脂上依次偶联氨基酸,延长肽链、合成多肽的固相合成法,在固相法中,每步反应后只需简单地洗涤树脂,便可达到纯化目的。克服了经典液相合成法中的每一步产物都需纯化的难题,为多肽的自动化合成奠定了基础。为此,Merrifield获得1984年诺贝尔化学奖。自Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以来,经过不断的改进和完善,到今天固相法已成为多肽合成的常规方法。

     在固相合成过程中,为了防止副反应的发生,参加反应的氨基酸的侧链都是被保护的;而羧基端是游离的,并且在反应之前必须活化。固相合成策略有两种,即Fmoc和Boc策略。由于Fmoc比Boc存在很多优势,现在大多采用Fmoc法合成。在一些特定的合成中,仍采用Boc合成策略,比如:在合成硫酯或酯肽时,;在亮丙瑞林的合成过程中,前几步合成采用Boc策略。

合成过程的每个循环由以下四步反应构成,反复循环直到肽链延伸至所需长度时即可完成。


1.脱保护:Fmoc保护的氨基酸必须用一种碱性溶剂(piperidine、DBU、piperazine等)去除氨基的保护基团。
2.活化:待连接的氨基酸的羧基被活化剂所活化。
3.偶联:活化的羧基与前一个氨基酸裸露的氨基反应,形成肽键。在此步骤使用过量的试剂促使反应完成。

4.洗涤:反应完成后,用DMF洗涤缩合剂和未反应完的氨基酸。